以下是生化實(shí)驗(yàn)中常用試劑的分類及用途總結(jié),結(jié)合實(shí)驗(yàn)安全與操作要點(diǎn),供實(shí)驗(yàn)參考:
一、基礎(chǔ)化學(xué)試劑
1. 酸堿類試劑
鹽酸(HCl)、氫氧化鈉(NaOH)
作用 :調(diào)節(jié)溶液pH值,配制緩沖液。
應(yīng)用 :細(xì)胞裂解液、酶反應(yīng)體系的pH調(diào)控。
硫酸(H?SO?)、乙酸(CH?COOH)
作用 :強(qiáng)酸/弱酸,用于沉淀蛋白、調(diào)節(jié)酸性環(huán)境。
應(yīng)用 :蛋白質(zhì)變性實(shí)驗(yàn)、DNA提取中的酸性條件設(shè)置。
2. 鹽類試劑
氯化鈉(NaCl)
作用 :維持滲透壓,促進(jìn)蛋白溶解或沉淀。
應(yīng)用 :DNA提取中的鹽溶液(如TE緩沖液含NaCl)、細(xì)胞培養(yǎng)液。
氯化鉀(KCl)、氯化鎂(MgCl?)
作用 :提供離子環(huán)境,激活酶(如Mg2?是DNA聚合酶的輔因子)。
應(yīng)用 :PCR反應(yīng)體系、酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)。
3. 有機(jī)溶劑
乙醇(Ethanol)、異丙醇(Isopropanol)
作用 :沉淀核酸、蛋白,固定細(xì)胞,消毒。
應(yīng)用 :DNA/RNA提取中的沉淀步驟、實(shí)驗(yàn)器材消毒。
丙酮(Acetone)、二甲亞砜(DMSO)
作用 :溶解脂類、難溶性化合物(如DMSO溶解PCR引物)。
應(yīng)用 :脂質(zhì)提取、細(xì)胞凍存液(DMSO作為凍存保護(hù)劑)。
二、生物大分子研究試劑
1. 核酸相關(guān)試劑
Tris HCl緩沖液
作用 :維持核酸提取液的pH穩(wěn)定(通常pH 7.5 8.5)。
應(yīng)用 :DNA/RNA提取試劑盒、質(zhì)粒純化。
乙二胺四乙酸(EDTA)
作用 :螯合金屬離子,抑制核酸酶活性。
應(yīng)用 :DNA保存液、細(xì)胞裂解液(如TE緩沖液含EDTA)。
十二烷基硫酸鈉(SDS)
作用 :強(qiáng)去污劑,裂解細(xì)胞并變性蛋白。
應(yīng)用 :DNA提取中的細(xì)胞裂解、SDS PAGE凝膠電泳(分離蛋白)。
2. 蛋白質(zhì)相關(guān)試劑
Tris HCl緩沖液(蛋白專用,pH 6.8 8.8)
作用 :維持蛋白溶液的pH,防止變性。
應(yīng)用 :蛋白提取、Western blot實(shí)驗(yàn)。
苯甲基磺酰氟(PMSF)
作用 :絲氨酸蛋白酶抑制劑,防止蛋白降解。
應(yīng)用 :蛋白提取過程中保護(hù)目標(biāo)蛋白。
考馬斯亮藍(lán)(Coomassie Brilliant Blue)
作用 :與蛋白結(jié)合顯色,用于蛋白定量(Bradford法)或電泳染色。
應(yīng)用 :蛋白濃度測(cè)定、SDS PAGE凝膠染色。
三、染色與檢測(cè)試劑
1. 核酸染色劑
溴化乙錠(EB)
作用 :插入DNA雙鏈,紫外下顯熒光,用于電泳檢測(cè)核酸。
注意 :強(qiáng)致癌物,現(xiàn)多被安全替代物(如SYBR Green、GoldView)取代。
甲基綠(Methyl Green)、派洛寧(Pyronin)
作用 :分別染色DNA(綠色)和RNA(紅色),用于細(xì)胞內(nèi)核酸定位。
應(yīng)用 :組織切片或細(xì)胞涂片的核酸染色。
2. 蛋白染色劑
麗春紅S(Ponceau S)
作用 :可逆性染色蛋白,用于Western blot中轉(zhuǎn)膜效率驗(yàn)證。
應(yīng)用 :膜上蛋白的快速可視化檢測(cè)。
銀染試劑(硝酸銀、甲醛等)
作用 :高靈敏度染色蛋白,用于電泳后微量蛋白檢測(cè)。
應(yīng)用 :雙向電泳(2 DE)后的蛋白圖譜分析。
3. 細(xì)胞活性檢測(cè)試劑
臺(tái)盼藍(lán)(Trypan Blue)
作用 :死細(xì)胞染色(活細(xì)胞拒染),用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率評(píng)估。
應(yīng)用 :細(xì)胞培養(yǎng)中的 viability 檢測(cè)。
MTT試劑(3 (4,5 二甲基噻唑 2) 2,5 二苯基四氮唑溴鹽)
作用 :檢測(cè)細(xì)胞代謝活性,活細(xì)胞線粒體酶將MTT還原為紫色甲臜。
應(yīng)用 :細(xì)胞增殖或毒性實(shí)驗(yàn)(如藥物篩選)。
四、緩沖液與溶液
1. 常用緩沖液
磷酸鹽緩沖液(PBS,pH 7.2 7.4)
成分 :NaCl、KCl、Na?HPO?、KH?PO?
作用 :模擬生理滲透壓,維持pH穩(wěn)定,用于細(xì)胞洗滌、保存。
應(yīng)用 :細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化實(shí)驗(yàn)。
Tris 鹽酸緩沖液(Tris HCl,pH 6.8 8.8)
作用 :廣泛用于核酸和蛋白實(shí)驗(yàn)的pH緩沖。
應(yīng)用 :DNA提取、SDS PAGE凝膠配制(分離膠pH 8.8,濃縮膠pH 6.8)。
2. 特殊用途溶液
TE緩沖液(Tris EDTA,pH 8.0)
作用 :溶解并保存DNA,EDTA抑制核酸酶。
應(yīng)用 :質(zhì)粒DNA、基因組DNA的長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
TAE/TBE緩沖液(用于核酸電泳)
成分 :Tris、乙酸/硼酸、EDTA
作用 :提供電泳電場(chǎng)環(huán)境,EDTA抑制核酸酶。
應(yīng)用 :瓊脂糖凝膠電泳分離DNA/RNA。
五、酶與輔酶類試劑
DNA聚合酶(如Taq酶、Pfu酶)
作用 :催化DNA鏈合成,用于PCR擴(kuò)增。
應(yīng)用 :基因克隆、突變檢測(cè)。
限制性內(nèi)切酶(如EcoRI、HindIII)
作用 :識(shí)別并切割特定DNA序列,用于基因工程。
應(yīng)用 :質(zhì)粒構(gòu)建、DNA酶切分析。
辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)
作用 :酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)或Western blot中的信號(hào)放大。
應(yīng)用 :抗原 抗體反應(yīng)的顯色檢測(cè)(如DAB顯色)。
六、安全與防護(hù)注意事項(xiàng)
1. 有毒試劑 :如EB、PMSF、DMSO需在通風(fēng)櫥操作,佩戴手套和護(hù)目鏡。
2. 易燃易爆試劑 :乙醇、丙酮遠(yuǎn)離火源,密封保存。
3. 強(qiáng)酸強(qiáng)堿 :HCl、NaOH需小心操作,避免皮膚接觸,用后及時(shí)蓋緊瓶蓋。
4. 生物危害 :涉及病毒、細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)試劑需滅菌處理,按生物安全等級(jí)操作。